實(shí)驗(yàn)流程:
1.準(zhǔn)備細(xì)胞、藥物后，檢測(cè)藥物IC50(72h)，待IC50(SPSS軟件統(tǒng)計(jì))結(jié)果
出來(lái)后，與客戶匯報(bào)進(jìn)展，推進(jìn)項(xiàng)目(預(yù)計(jì)時(shí)間2-3周);
2.采用藥物共培養(yǎng)的方式構(gòu)建耐藥株，具體為:調(diào)整細(xì)胞密度60%左右，藥物濃
度為IC5、IC10、IC20、IC30，含藥培養(yǎng)48-72h后撤藥(采用6孔板實(shí)驗(yàn)，具體
時(shí)間已顯微鏡觀察為準(zhǔn)(細(xì)胞死亡不超過(guò)20%)，拍照記錄)，換入正常培養(yǎng)基，
觀察細(xì)胞狀態(tài)，
3.在加藥共培養(yǎng)的過(guò)程中，觀察細(xì)胞每次加藥培養(yǎng)后的狀態(tài)和恢復(fù)速度，如果細(xì)
胞在撤藥后，恢復(fù)時(shí)間較長(zhǎng)(超過(guò)7天)，狀態(tài)較差，則說(shuō)明該細(xì)胞不適合構(gòu)建耐
藥株，成功概率較低，建議終止實(shí)驗(yàn);(預(yù)計(jì)總時(shí)間2月內(nèi))
4.待細(xì)胞生長(zhǎng)恢復(fù)后，凍存一支，重復(fù)步驟2(依據(jù)細(xì)胞情況，可適當(dāng)提高藥物
濃度)，進(jìn)行5~8輪培養(yǎng)后，即可構(gòu)建出有一定耐藥性的細(xì)胞
5.細(xì)胞構(gòu)建完成后，給客戶提供一株親本株和一株耐藥株，提交的結(jié)果是親本株
和耐藥株的IC50結(jié)果，耐藥倍數(shù)(大于5倍)和實(shí)驗(yàn)報(bào)告;(預(yù)計(jì)總時(shí)間8-10月)